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平板克隆形成實驗

平板克隆形成實驗

簡要描述:
平板克隆形成實驗可以檢測貼壁細胞的克隆形成能力。

更新時間:2023-10-30

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廠商性質:其他

平板克隆形成實驗可以檢測貼壁細胞的克隆形成能力,克隆形成試驗可反映細胞群體依賴性和增殖能力。一般細胞在體外增殖六代以 上,其后代形成的細胞群體稱為細胞集落或克隆。每個克隆由單一細胞而來,含有50個以上細胞大小在0.3-1mm之間。通過克隆形成可檢測各種理化因素對細胞克隆形成能力的影響。

平板克隆形成實驗基本步驟: 

1.取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞并把細胞縣浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中衡用。

2.將細胞縣液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種合10mL 37"C預溫培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37C、5% CO2及飽和溫度的細胞培養箱中培養2-3周。

3.經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定細胞5ml固定15分鐘。然后安固定液加適量GIMSA應用染色液染10-30分鐘然后用流水緩慢洗去染色源,空氣干燥。

4.將平皿倒置并疊加一張帶網格的適明膠片,用肉眼直接計數克隆或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數,再計算克隆形成率,克隆形成率=克隆數/接種細胞數。

服務流程:

1)項目方案的確定,包括目的細胞、 細胞處理方式及處理時間等;

2)細胞培養;

3)克隆形成實驗;

4)克隆形成實驗圖片及實驗報告。

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